Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2


НазваниеМетодические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2
страница2/4
Дата публикации28.04.2013
Размер0.53 Mb.
ТипМетодические указания
userdocs.ru > Биология > Методические указания
1   2   3   4

7. Для определения микробного числа почвы осуществляют посев десятикратных разведений почвы в глубину или на поверхность сусло-агара (для роста дрожжевой и грибной микрофлоры) и МПА (для роста бактериальной флоры). Затем подсчитывают количество выросших колоний для каждого разведения и вычисляют микробное число, зная, что 1 колония – это 1 клетка.

Для определения коли-титра почвы используется посев почвенных разведений на жидкую среду Кесслера (содержит желчь, лактозу, пептон) с последующим пересевом положительных проб на среду Эндо, на которой E. coli образует тёмно-красные колонии с металлическим блеском. Присутствие E. coli подтверждают микроскопически.

Перфрингенс-титр почвы определяется путём посева на среду Вильсона-Блера, на которой ^ C. perfringens образует чёрные колонии, а образующийся газ разрывает среду, или на среду Тукаева (молочная среда), на которой данный микроорганизм интенсивно сбраживает лактозу и молоко створаживается, а образующийся газ разрывает сгустки казеина и вытесняет в верхнюю часть пробирки.

8. Критерии санитарной оценки почвы по коли-титру и перфрингенс-титру.

Таблица 1.

^ Оценка почв

Коли-титр

Перфрингенс-титр

Незагрязнённая

1 г и больше

0,1 г и больше

Слабо загрязнённая

0,1-0,01

0,01-0,001

Умеренно загрязнённая

0,01-0,001

0,001-0,0001

Сильно загрязнённая

0,001 и меньше

0,0001 и меньше


Задача 4. Охарактеризовать микрофлору воды и методы оценки её санитарно-гигиенического состояния.

Для этого надо знать:

1. Вода – естественная среда обитания всего живого, в том числе и микроорганизмов. В воде формируются определённые микробные биоценозы, численность и состав которых определяется физико-химическим состоянием воды (температура, содержание CO2 и O2, рН, солевой состав, облучение солнечными лучами), содержанием питательных веществ, флорой и фауной, глубиной водоёма, выпуском сточных и промышленных вод. На состав микробных биоценозов существенное влияние оказывают другие обитатели водоёмов – планктон (совокупность организмов, взвешенных в воде), простейшие, бактериофаги.

Больше всего микроорганизмов находится в придонных слоях, на дне, в прибрежной зоне (осенью и весной), т.к. именно в плотных частицах, в пористых материалах задерживаются необходимые для них питательные вещества. Чем больше органических веществ содержится в открытых водоёмах, тем у них более богатая микрофлора. Таким образом, микрофлора рек и озёр определяется, в основном, степенью их биологического загрязнения, то есть поступлением сточных и промышленных вод и степенью их очистки. В большой степени она отражает микрофлору почвы около водоёма, т.к. микроорганизмы попадают в воду с частичками пыли, ливневыми, сточными, талыми водами. Микроорганизмы также попадают в водоёмы из организма рыб, гниющих растений, с отбросами и выделениями человека, животных, а также из воздуха.

2. В пресных водоёмах (реки, озёра) нормальными обитателями являются Micrococcus roseus и др. микрококки, Pseudomonas fluorescens, извитые формы (Sp. rubrum). Разнообразные сапрофиты поступают из почвы: p. Azotobacter, p. Nitrobacter, p. Proteus, p. Pseudomonas, p. Spirillum и др. Сапрофитные микроорганизмы выполняют роль мусорщиков, расщепляя органические отходы, делая их пригодными для метаболических процессов других живых существ. Они являются пищей для раков и моллюсков. Если в воде содержится большое количество органических веществ, то в ней обнаруживаются клостридии и другие анаэробы, увеличивается и число аэробов (бактерии, вибрионы, спирохеты). Вообще же анаэробов в воде мало, в основном они встречаются в иле, на дне. В водоёмах, богатых сероводородом, обитают фотосинтезирующие бактерии.

3. Микробные биоценозы воды постоянно изменяются и обновляются. Особенно быстро они изменяются в проточной воде рек в зависимости от изменения состава воды рек, вызванного выпуском промышленных и сточных вод. В реках, протекающих вблизи или в черте населённых пунктов, содержится значительное количество представителей кишечной микрофлоры человека. По мере удаления от населённого пункта концентрация их в воде снижается.

4. Микрофлора морей и океанов не является такой богатой и представлена, в основном, галофильными (солелюбивыми) и светящимися (встречающимися на глубине 3700-10000 метров) микроорганизмами. Галофильные вибрионы могут поражать моллюсков, некоторые виды рыб, при употреблении которых в пищу возникают пищевые токсикоинфекции.

5. Вода артезианских скважин почти не содержит микроорганизмов, обычно задерживающихся верхними слоями почвы. В подземные воды могут проникать почвенные микробы, их численность зависит от глубины залегания водоносного слоя, от грунта, сезона, погоды. Дожди, таяние снегов способствуют вымыванию микроорганизмов из почвы и увеличению их количества в грунтовых водах.

6. Загрязнение воды открытых водоемов представителями нормальной микрофлоры кишечника, патогенными и условно-патогенны­ми микроорганизмами происходит в результате вымывания их из почвы грунтовыми, талыми, ливневыми водами и попадания в реки, озёра, прибрежные воды морей, а также в результате поступления в водоемы сточных и промышленных вод, богатых органическими веществами из прибрежных населённых пунктов, выпуска сточных вод с плавающих судов, стирки белья, купания лошадей, попадания в воду трупов грызунов, погибших от инфекций.

Эти бактерии не приспособлены к самостоятельному существованию в воде, т.к. в водоёмах идут процессы самоочищения воды, что зависит от многих физических, химических и биологических факторов: от скорости течения воды, прозрачности, освещённости, от наличия питательных веществ, от антагонистического действия постоянных обитателей и лизиса бактерий фагами.

Но патогенные и условно-патогенные микроорганизмы в зависимости от степени загрязнённости водоёма могут содержаться и определённое время сохранять жизнеспособность в воде: сальмонеллы – от 2 дней до 3 месяцев, шигеллы 5-9 дней, лептоспиры 7-150 дней, холерный вибрион до нескольких месяцев и даже способен размножаться.

Таким образом, вода может быть фактором передачи многих инфекционных заболеваний – брюшного тифа и паратифа, дизентерии, сальмонеллёза, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций (полиомиелита, гепатита), гастроэнтеритов, туляремии. В связи с этим необходимо проводить санитарно-эпидемиологический контроль воды.

7. Для оценки степени загрязнения воды определяют: 1) микробное число воды - количество всех микроорганизмов в 1 мл воды;
2) количество санитарно-показательных микроорганизмов воды.

Санитарно-показательными микроорганизмами для воды являются:

а) БГКП, E. coli, Str. faecalis (свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении, так как они погибают через несколько дней);

б) p. Citrobacter, p. Enterobacter (свидетельствуют о сравнительно давнем фекальном загрязнении, так как погибают через неделю и даже месяц).

Чаще всего определяют:

- коли-индекс – число жизнеспособных клеток E. coli в 1 л воды;

- коли-титр – наименьший объём воды, в котором обнаруживается 1 жизнеспособная клетка ^ E. coli.

Кроме того, для характеристики свежего фекального загрязнения воды используют также титр энтерококка. Вместо коли-титра часто определяют титр БГКП, как индикатор фекального загрязнения воды. Если этот показатель превышает допустимые нормы, проводят дополнительные исследования на наличие бактерий – показателей свежего фекального загрязнения – E. coli и Str. faecalis. На старое фекальное загрязнение указывает отсутствие БГКП и наличие определённого количества C. perfringens (устойчивых спорообразующих бактерий).

По эпидемиологическим показаниям проводят непосредственное выделение из воды патогенных микроорганизмов (возбудителей брюшного тифа, дизентерии), для чего используют бактериологические и биологически методы, люминесцентную микроскопию, определение увеличения титра специфического фага и др.
Задача 5. Описать методы определения микробного числа, коли-индекса и коли-титра воды.

Для этого надо знать:

1. Для определения микробного числа водопроводной воды ее берут из уличных водозаборов или кранов внутренних водопроводов. Краны обжигают, полностью открывают и 10 минут спускают воду, а затем отбирают не менее 0,5 л воды с соблюдением требований асептики. Затем производят посев 10-кратных разведений (1:10, 1:100 и т.д.) воды глубинным методом Коха: по 1 мл воды вносят в стерильные чашки Петри, после чего добавляют 12-15 мл расплавленного и остуженного до 45 C МПА, быстро и тщательно перемешивают, а после застывания помещают чашки в перевёрнутом виде в термостат на 24-48 часов. После этого подсчитывают число выросших колоний (если их больше 100, то используют специальную камеру Вольфгюгеля), это число умножают на степень разведения, и результаты выражают количеством бактерий в 1 мл воды.

Можно использовать метод поверхностного посева: 0,1 мл различных разведений воды наносят стерильной пипеткой на поверхность подсушенного МПА в чашках Петри и тщательно растирают по всей поверхности стерильным шпателем.

При определении микробного числа на МПА учитываются далеко не все микроорганизмы, а лишь гетеротрофные, мезофильные, аэробные виды. Для выявления грибов и дрожжей осуществляют посев на сусло-агар и посевы инкубируют 2-3 суток при 24 C.

Для определения микробного числа дистиллированной воды ее отбирают в количестве 300 мл в стерильные бутылки из бюретки, конец которой предварительно обжигают ваткой, смоченной спиртом. Бутылки закрывают ватными пробками и бумажными колпачками. Дистиллированную воду, используемую для приготовления инъекционных растворов, отбирают в стерильные флаконы по 15-20 мл из ёмкостей, в которых проводится стерилизация. Посев производят так же, как и для водопроводной воды.

Воду из колодцев (200-300 мл), речную воду и воду других открытых водоёмов и бассейнов (100 мл) берут с определённой глубины при помощи батометра и делают посевы в объёмах 1,0; 0,1; 0,001 мл.

2. Для определения коли-титра и коли-индекса разработаны стандартные методы исследования. Воды централизованного водоснабжения и артезианских скважин исследуются в соответствии с ГОСТ 18963073. Для вод открытых водоёмов и сточных вод ГОСТ не предусмотрен, поэтому в зависимости от качества воды и условий применяются различные методы.

Определение коли-титра проводят двухфазным бродильным методом.

^ Первый этап (1-ый день) – делают посев на первый бродильный титр. Посев осуществляют в среду Эйкмана (глюкозопептонная среда – ГПС).

Для посева малых объёмов воды (при анализе воды открытых водоёмов) используется разведённая среда Эйкмана (1% пептон; 0,4% NaCl; 0,5% глюкоза).

Для посева больших объёмов – концентрированная среда Эйкмана, содержащая 10-кратную концентрацию основных компонентов, т.к. в очень разбавленной среде E. coli не вырастет.

Разведённую среду Эйкмана разливают в пробирки с поплавками по 10 мл и засевают по 1 мл неразведённой воды или разведённой 1:10 (0,1 мл), 1:100 (0,01 мл) и т.д.

Концентрированную среду Эйкмана разливают в пробирки с поплавками по 1 мл и в колбы по 10 мл и засевают соответственно по 10 мл или 100 мл воды.

Таким образом, концентрация питательных веществ в случае применения концентрированной или разведённой среды Эйкмана после посева соответствующих объёмов воды становится одинаковой.

Для исследования водопроводной воды делают посев двух проб по 100 мл в колбы и десяти проб по 10 мл в пробирки.

Выбор объёма воды для посева при определении титра кишечной палочки зависит от источника водоснабжения и от степени предполагаемого микробного загрязнения. При исследовании воды открытых водоёмов делают посевы в объёмах 100, 10, 1 и 0,1 мл.

Посевы инкубируют при 37C 24 часа. Через сутки просматривают посевы. На наличие роста бактерий, в том числе и E. coli, указывают диффузное помутнение и обильно газообразование.

При отсутствии роста в водопроводной воде делается заключение о том, что коли-титр больше 333.

^ Второй этап (2-ой день) – из тех колб и пробирок, где наблюдается наличие мути и газа или одного помутнения, делают пересевы на дифференциально-диагностическую среду Эндо (на одной чашке можно сделать посевы из нескольких разведений, поделив её на 8-12 сегментов). Посевы ставят в термостат при 37 C на сутки.

На этом этапе для биохимического подтверждения присутствия E. coli в пробах с наличием газа и мути можно использовать пересев не на среду Эндо, а на розолово-дифференциальный агар – РДА. РДА – это плотная питательная среда на основе МПА с добавлением 5% желчи, 1% лактозы, 0,1% глюкозы и индикатора – розоловой кислоты. При рН 7,0-7,2 после стерилизации среда имеет розоватый цвет. Пересевы ставят в термостат при 37 C на 24 часа. Признаки роста E. coli на РДА - пожелтение среды в скошенной части и в столбике, конденсационная жидкость вспенивается, в столбике РДА имеются разрывы. При росте паракишечных палочек на РДА цвет среды в скошенной части не изменяется или появляется малиновый оттенок (образуется щелочь), в столбике РДА – пожелтение среды с разрывами, имеется пена в конденсационной жидкости. Наличие E. coli подтверждается микроскопически: если в мазках видны грамотрицательные мелкие палочки, результат считается положительным.

Третий этап (3-ий день) – через сутки просматривают чашки. Колонии БГКП (в том числе и E. coli) на среде Эндо будут гладкие, красного цвета, с металлическим блеском.

Бесцветные прозрачные колонии, выросшие на среде Эндо отвивают на косой агар с последующей идентификацией по пёстрому ряду для выявления патогенных микробов паратифозной и дизентерийной группы.

Для микроскопического подтверждения наличия ^ E. coli из таких подозрительных колоний делают мазки и окрашивают по Граму.

Для биохимического подтверждения колоний E. coli (при наличии в препарате грамотрицательных неспоровых палочек) проводят постановку оксидазного теста: материал 2-3 колоний со среды Эндо наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную соответствующим реактивом (диметил-n-фенилендиамином). При наличии оксидазы (у оксидазоположительных микробов) бумажка синеет в течение 1 минуты. Оксидазный тест позволяет отличить оксидазоотрицательных бактерий (E. coli, p. Escherichia, p. Citrobacter, p. Enterobacter) от грамотрицательных, но оксидазоположительных бактерий (семейство Pseudomonada­ceae).

Грамотрицательные палочки, не образующие оксидазу, вновь исследуют в бродильном тесте – вносят в полужидкий питательный агар с 0,5% раствором глюкозы и инкубируют при 37С в течение суток. Кишечная палочка растет на этой среде с образованием кислоты и газа.

При положительном результате по количеству так называемых положительных объёмов (с ростом E. coli) по статистическим таблицам ГОСТа 18963-73 определяют коли-титр и коли-индекс. Например, после второго бродильного теста подтвердили присутствие E. coli в одной колбе (с посевом 100 мл воды) и в трёх пробирках (с посевом по 10 мл воды). Ищем в таблице по вертикали 1 и горизонтали 3. На пересечении находим коли-титр 56 и коли-индекс 18.

3. Для прямого и более быстрого определения коли-индекса пользуются методом мембранных фильтров. Для этого исследуемую воду пропускают через мембранный фильтр №3 (диаметр пор = 0,7 мкм), помещённый в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуум-насосу. Мембранные фильтры предварительно стерилизуют кипячением в дистиллированной воде.

Воду из водопроводной системы Москвы и Санкт-Петербурга и воду артезианских скважин фильтруют в объёме 500 мл, воду других городов – в объёме 333 мл. Чистую воду открытого водоёма фильтруют в объёме 100; 10; 1 и 0,1 мл, более загрязнённую воду перед фильтрацией разводят стерильной водой.

После фильтрации фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашку Петри и после инкубации при 37 C в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для БГКП.

Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму, а также ставят оксидазный тест. Для этого фильтр с выросшими на нём колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-n-фенилендиами­ном. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет.

2-3 колонии, не изменившие окраски реактива, засевают в разве­дённую среду Эйкмана, инкубируют в течение суток при 37 C. Если в пробирках имеется газообразование, дают окончательный положительный ответ на наличие E. coli.

Коли – индекс рассчитывают по количеству красных колоний на фильтре. Например, на фильтре выросли 3 окрашенные колонии, а воды было 300 мл. Следовательно, в 100 мл – 1 клетка E. coli, а в 1000 мл – 10 клеток, т.е. коли-индекс равен 10. Исходя из этого значения коли-индекса, рассчитываем коли-титр: 1000/10 = 100. Если коли-индекс равен 5, то коли-титр равен 1000/5=200.

4. Нормативные показатели по коли-титру и коли-индексу для водопроводной воды различных городов и воды открытых водоемов следующие:

Таблица 2.




Коли-титр

Коли-индекс

Водопроводная вода г. Москва и Санкт-Петер­бург

Не менее 500

Не более 2

Водопроводная вода других крупных городов

Не менее 333

Не более 3

Вода открытых водоёмов

111

9

Микробное число дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарств, не должно превышать 10-15.
1   2   3   4

Похожие:

Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2
Доркина Е. Г. Физиология микроорганизмов: Учебно-методическое пособие для студентов. – Пятигорск: Пятгфа, 2008. – 46 с
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2
Для изучения данного раздела курса программой предусматривается 2 часа лекций и 6 часов лабораторных занятий
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания для обучающихся по выполнению внеаудиторной...
Согласно требований фгос нпо и плана учебного процесса обучающийся обязан выполнить по каждой учебной дисциплине определенный объем...
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания по организации внеаудиторной самостоятельной...
Государственное бюджетное образовательное учреждение среднего профессионального образования
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания по выполнению самостоятельной внеаудиторной...
Черкасова Людмила Дорофеевна – преподаватель Медицинского колледжа Многопрофильного колледжа Новгородского государственного университета...
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания по организации самостоятельной работы и аудиторных...
Методические указания предназначены для студентов первого курса, обучающихся на специальности 141403. 65 «Атомные станции: проектирование,...
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические рекомендации для выполнения самостоятельной внеаудиторной...
Тема: «Элементы теории вероятностей»
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания для самостоятельной работы студентов по дисциплине...
Методические указания подготовлены в соответствии с программой дисциплины "Кооперация и агропромышленная интеграция в апк". Рекомендованы...
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания для самостоятельной работы студентов по курсу...
Методические указания для самостоятельной работы по курсу «Страхование» («Страховое дело») / дгту, Ростов н/Д, 2010
Методические указания для самостоятельной внеаудиторной работы студентов Выпуск 2 iconМетодические указания и контрольные задания для самостоятельной работы...
Акульшина Т. С., Стебко Т. В. Теория вероятностей и математическая статистика. Методические указания и контрольные задания. Для самостоятельной...
Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2015
контакты
userdocs.ru
Главная страница